1.0目的

制定使用歧管的膜過濾法對樣品進行無菌測試的程序。

2.0范圍

適用于質量控制微生物實驗室中稀釋研究和穩定性研究樣品的無菌測試。

3.0責任

受過訓練的質量控制/微生物學

4.0問責制

部門主管

5.0程序

5.1一般說明和注意事項

5.1.1按照SOP進入和退出微生物檢測和無菌檢測區域。
5.1.2確保所有無菌或無菌物品在日期之前有效/未過期，并且包裝袋是完整的。如果發現任何包裝損壞或完整性受損，請不要使用此類材料。
5.1.3確保要使用的所有培養基和稀釋劑均已預先孵育。檢查介質是否受到污染或物理損壞。對于液體硫代乙醇酸酯培養基，如果超過三分之一的培養基已獲得粉紅色（刃天青環），則請勿使用此類培養基容器。
5.1.4檢查物理參數（溫度，濕度和壓差）），并在開始活動前確保它們在限制范圍內。
5.1.5在每次無菌測試期間，應按照SOP 進行環境監測。

5.2將材料轉移到無菌測試區和cRABS

5.2.1進行無菌測試所需的材料，如培養基，沖洗液或稀釋劑，測試附件即，鑷子，剪刀，帶有管道的春分排水盤，排水收集容器等，應在高壓滅菌器中滅菌，卸載并儲存在無菌環境中一側（緩沖室）。
5.2.2所有其他材料應按以下方式轉移：
5.2.2.1將所有與無菌性測試有關的材料（例如樣品和其他無菌配件）保存在通向LAL測試室的培養箱中的通過箱中。
5.2.2.2從LAL室卸載物料并保存在LAF中。
5.2.2.3取下產品小瓶的翻轉密封，并使用過濾的消毒液對小瓶的外表面進行消毒。
5.2.2.4使用過濾的消毒液消毒無菌附件包裝的外表面。
5.2.2.5將所有物料轉移到動態通道箱開口處至緩沖室。確保動態通道盒處于開啟狀態。
5.2.2.6從緩沖室卸下物料，然后轉移到無菌測試室。
5.2.3按照SOP
5.2.4 操作cRABS 5.2.4將所有必需的材料，如培養基容器，已消毒的配件（如歧管，過濾漏斗，鑷子，剪刀等），已過濾的消毒液和70％IPA和產品樣品送入無菌測試室。
5.2.5除產品樣品外，所有材料均應保存在cRABS檢驗箱中。
5.2.6關閉cRABS通行箱，并用已過濾的70％IPA擦拭材料的外表面。打開紫外線燈，使材料暴露不少于15分鐘。
5.2.7至少15分鐘后，通過提供的通道將材料從cRABS通行箱轉移到cRABS。
5.2.8如果是樣品，請將其保存在cRABS 通行證箱中，關閉通行箱，并用過濾后的70％IPA擦拭樣品的外表面。不要打開紫外線燈。讓消毒劑干燥。
5.2.9通過提供的通道將樣品從cRABS通行箱轉移到cRABS。
5.2.10試驗前，確保每件物品上的消毒劑均已正確干燥且包裝成一體。
5.2.11將排水收集容器牢固地連接到cRABS排水口。

5.3樣品要求

5.3.1容器數量：根據相應的規程
5.3.2待測樣品的體積
穩定性樣品：

容器內容	每種介質要測試的zui小數量
少于1毫升	總含量
1至40毫升	內容物的一半但不少于1毫升
大于40毫升但小于100毫升	20毫升
100毫升以上	含量的10％，但不少于20 ml

注意：如果填充量大于10 ml，則考慮從3個小瓶中剩下的樣品進行細菌內毒素測試（在測試之前合并）
稀釋研究樣品：根據各自的方案，但不少于20 ml

5.4使用流形的開放漏斗法進行無菌測試

5.4.1將無菌歧管放置在cRABS內，并通過排水收集容器或燒瓶連接到真空泵。
5.4.2將無菌的膜過濾漏斗放在歧管的支架上。將無菌的0.45µ 膜過濾器放在過濾漏斗的過濾器支架上。
5.4.3打開過濾組件的蓋子，并用100 ml沖洗液潤濕膜，然后打開真空泵進行過濾。
5.4.4無菌地打開產品容器的密封并將每個產品容器的內容物轉移到過濾組件中。或者，使用無菌注射器和針頭無菌取出內容物并轉移。如果是凍干產品，請先用所需體積的無菌稀釋劑重新配制樣品，然后再轉移內容物。
5.4.6打開真空泵并過濾內容物。
5.4.7過濾樣品后，加入100 ml沖洗液并過濾。重復此過程，直到3 x 100 ml沖洗液通過膜過濾。
注意：如果與以上不同，應根據驗證更改沖洗液和沖洗液的體積。
5.4.8沖洗后，用無菌鑷子和剪刀將膜無菌切成兩半。將膜的一半轉移到100 ml大豆酪蛋白消化培養基中，另一部分轉移到100 ml硫代乙醇酸液體培養基試管中。
5.4.9在試管上貼上產品名稱，批號/ AR號，介質批號，日期和分析員姓名縮寫。

5.5負面產品控制測試

5.5.1在每個無菌測試階段進行一次陰性對照測試，以作為測試階段中培養基和稀釋液無菌性和條件的對照。
5.5.2通過以100毫升0.1％無菌蛋白water水為產品并在操作過程中進行以下
zui大操作來進行測試：5.5.2.1如果在測試過程中進行的zui大操作是針對凍干產品，則所有步驟凍干產品測試中涉及的產品應進行陰性產品控制。
5.5.2.2如果在測試期間對液體產品進行的zui大操作，則應對液體產品中涉及的所有步驟進行負面產品控制。

5.6物料的轉移和處置

5.6.1測試完成后，將所有附件，用過的樣品容器，空的介質稀釋劑容器通過通道箱從緩沖室轉移到高壓滅菌室，轉移到高壓滅菌區。
5.6.2將培養罐和培養基管通過動態傳遞箱從緩沖室轉移到LAL測試室，然后通過傳遞箱從LAL測試室傳遞到培養箱。
5.6.3用過濾的消毒劑清潔cRABS。通過將足夠量的消毒劑溶液通過端口和管道轉移，使所有表面都與消毒劑溶液接觸，從而對端口和管道進行消毒以收集下水道。
5.6.4如果排水收集管關閉閥門，則斷開不銹鋼打開TC夾以打開容器。通過緩沖室中的通過箱將容器轉移到高壓滅菌器中。
5.6.5通過添加適當的去活劑去活容器中的溶液，并按照SOP進行處置。

5.7孵化與觀察

5.7.1在22.5±2.5°C下孵育大豆酪蛋白消化培養基（SCM）無菌試管，在32.5±2.5°C下孵育液體硫代乙醇酸酯培養基（FTG）無菌試管14天。
5.7.2在每個工作日中，檢查在14天的溫育期內微生物生長的跡象，并記錄結果。如果第14天是每周休息或放假，則在下一個工作日進行觀察。
5.7.3在觀察過程中，任何渾濁，渾濁，沉淀，棉球類型增長，透明介質（渦旋時底部從底部升起）的明顯增長的證據，然后移開此類罐/管并按照SOP 進行識別/調查。在這種觀察的那天。
5.7.4孵育結束后，請按照下列說明處理培養基SOP處理媒體。

5.8驗收標準

5.8.1在培養期結束時，如果在任何無菌測試介質中都沒有微生物生長的跡象，則被測樣品/產品符合無菌要求。
5.8.2如果在任何一種介質中均發現了微生物生長的證據，則被測試的樣品/產品不符合無菌測試，除非可以清楚地證明該測試對與樣品/產品無關的原因無效經過測試。僅當滿足以下一個或多個條件時，該試驗才被視為無效：
5.8.2.1對無菌試驗區進行的微生物監測表明存在故障。
5.8.2.2對所涉及的測試過程中使用的測試程序進行檢查可以發現故障。
5.8.2.3在陰性對照中發現微生物生長。
5.8.2.4在確定從測試中分離出的微生物的身份之后，可以明確地將該物種（或這些物種）的生長歸因于進行無菌測試程序所用的材料和/或技術的缺陷。
5.8.5如果宣布測試無效，則必須以與原始測試相同的單位數重復進行測試。
5.8.6如果在重復測試中沒有發現微生物生長的跡象，則所檢查的產品符合無菌測試。
5.8.7如果在重復測試中發現微生物生長，則所檢查的產品不符合無菌測試。
有關：真菌和細菌常用培養基的培養條件

6.0縮寫

6.1 SOP-標準操作程序
6.2 cRAB-封閉式限制進入障礙系統
6.3％-百分比
6.4 UV-紫外線
6.5°C-攝氏度
6.6 ml-毫升
6.7 SCA-大豆酪蛋白消化瓊脂
6.8 SCM-大豆酪蛋白消化培養基