當涉及液體介質的蒸汽滅菌時，存在許多以各種方式處理的用戶顧慮。使用生物指示器（BI）監測這些循環以及所做的各種限制和循環修改可能導致假陽性或失敗循環。以下是用戶對液體介質蒸汽滅菌的一些循環修改或限制：
使用者需要在消毒過程中將培養瓶保持在容器中，因此沸騰不會遍布高壓
滅菌器。
根據制造商的說明，用戶需要在121°C下對介質進行15分鐘的滅菌。用戶無法找到在此短周期內死亡的BI。
由于介質對熱敏感，因此用戶無法運行更長的循環時間，如果使用更長的循環時間，則可能無法促進增長。
用戶的協議規定僅在15分鐘，121°C的循環中運行。
用戶已確定1L TSB瓶的循環暴露時間。現在，2升燒瓶應該用什么時間; 我加倍的時間？
當使用液體負載時會出現許多獨特的問題，如果循環用于硬質貨物或包裝貨物，則永遠不會出現。大多數項目不會對溫度敏感，因此不必擔心BI放置的沸騰或質疑。然而，對于液體負載，不需要將真**空氣去除或蒸汽滲透到多孔負載中。
驗證負載配置：
那么，為什么液體培養基滅菌和BI殺傷力會出現這么多問題呢？用于解決上述問題的一些方法實際上可能導致失敗的周期或BI為正的周期。這很大程度上是由于許多診所，大學或醫院中使用的大多數液體負載/介質循環配置未經驗證的事實。驗證負載配置周期提供了“獲取，記錄和解釋確定過程將始終如一地產生符合預定規格的產品所需結果的文檔化程序”（ISO / TS 11139：2006，定義2,55 2）在消毒介質中，期望的結果是產生具有某些品質的培養基，例如pH范圍，生長促進能力和不育性。
執行液體滅菌驗證：
當對要使用的所選曝光時間/溫度液體介質循環進行驗證時，需要確定從循環開始到使介質達到121℃所需的時間。這將被記錄為該特定周期所需的“上升”時間。如果使用1L培養基培養基完成，則需要對包括更大體積（例如2L培養瓶）的循環進行單獨驗證。為了確定裝載兩個1L TSB燒瓶的“啟動”時間，可以將溫度記錄儀放入每個培養基瓶中以記錄整個循環持續時間內的培養基溫度。該活性將重復至少兩個循環，每個循環含有新制備的培養基燒瓶。所有三個周期的“出現”時間應非常相似。例如，如果
現在有數據支持，在特定介質的一定數量的1L燒瓶的情況下，介質的溫度將在循環開始的16分鐘內達到121℃。應記錄燒瓶的數量和每個燒瓶的體積以及它們在高壓滅菌室內的位置，并且除非使用其他放置區域或更少的燒瓶進行繼續驗證，否則在將來使用的其他循環中必須保持相同。有必要驗證zui壞情況的負載，以便能夠預先確定所有其他負載在指定的16分鐘“上升”時間內也將達到121°C的溫度。
使用數據記錄器：
一個非常容易使用的熱敏電阻或數據記錄器，用于在滅菌周期內記錄介質的溫度，可以很容易地放在實際的介質瓶內。通過這樣做，可以確定正在消毒的實際溫度。將數據記錄器放置在高壓釜室內的架子上將不會顯示在培養瓶內實際發生的情況。記錄儀實際上必須放在介質瓶內。
在較長周期內運行媒體可能不會對媒體和增長促進能力產生不利影響。畢竟，運行35分鐘的周期需要20分鐘的啟動時間實際上是在121°C下的15分鐘周期。如果擔心周期長度，請運行周期，然后測試介質并驗證它是否仍按預期執行，并且增長促銷沒有受到影響。
每個瓶中運行不同的容量或在一個循環中運行不同數量的燒瓶是需要進行額外驗證工作的情況。運行1L燒瓶可能需要35分鐘的循環，其中幾個2L燒瓶可能需要額外的時間用于上升，并且可能需要45分鐘或更長時間。通過使用數據記錄器，可以輕松確定將不同體積的介質達到121°C所需的各種曝光時間。
