一、接種

將微生物接到適于它成長繁衍的人工培育基上或活的生物體內(nèi)的進程叫做接種。

１、接種東西和辦法

　　在試驗室或工廠實踐中，用得**多的接種東西是接種環(huán)、接種針。由于接種請求或辦法的不一樣，接種針的針尖部常做成不一樣的形狀，有刀形、耙形等之分。有時滴管、吸管也可作為接種東西進行液體接種。在固體培育基外表要將菌液均勻涂布時，需求用到涂布棒。（圖３－３）　

圖３－３　接種和別離東西

1．接種針 2.接種環(huán) 3.接種鉤 4.5.玻璃涂棒 6.接種圈 7.接種鋤 8.小解剖刀

　　　

　　常用的接種辦法有以下幾種：

　?。保﹦澗€接種 這是**常用的接種辦法。即在固體培育基外表作來回直線形的移動，就可到達接種的效果。常用的接種東西有接種環(huán)，接種針等。在斜面接種和平板劃線中就常用此法。

　　２）三點接種 在研討霉菌形狀經(jīng)常用此法。此法即把少數(shù)的微生物接種在平板外表上，成等邊三角形的三點，讓它各自獨立構(gòu)成菌落后，來調(diào)查、研討它們的形狀。除三點外，也有一點或多點進行接種的。

　　３）穿刺接種 在保藏厭氧菌種或研討微生物的動力經(jīng)常選用此法。做穿刺接種時，用的接種東西是接種針。用的培育基通常是半固體培育基。它的做法是：用接種針蘸取少數(shù)的菌種，沿半固體培育基中心向管底作直線穿刺，如某細菌具有鞭毛而能運動，則在穿刺線周圍能夠成長。

　?。矗不旖臃N 該法是將待接的微生物先放入培育皿中，然后再倒入冷卻**45°C擺布的固體培育基，敏捷輕輕搖勻，這么菌液就到達稀釋的意圖。待平板凝結(jié)以后，置適宜溫度下培育，就可長出單個的微生物菌落。

　?。担┩坎冀臃N 與澆混接種略有不一樣，即是先倒好平板，讓其凝結(jié)，然后再將菌液倒入平板上面，敏捷用涂布棒在外表作來回擺布的涂布，讓菌液均勻分布，就可長出單個的微生物的菌落。

　　６）液體接種 從固體培育基中將菌洗下，倒入液體培育基中，或許從液體培育物中，用移液管將菌液接**液體培育基中，或從液體培育物中將菌液移**固體培育基中，都可稱為液體接種。

　?。罚┐蜥樈臃N 該法是用打針的辦法將待接的微生物轉(zhuǎn)接**活的生物體內(nèi)，如人或其它動物中，多見的疫苗防止接種，即是用打針接種，接入人體，來防止某些疾病。

　?。福┗铙w接種 活體接種是專門用于培育病毒或其它病原微生物的一種辦法，由于病毒有必要接種于活的生物體內(nèi)才干成長繁衍。所用的活體可所以全部動物；也可所以某個離體活安排，例如猴腎等；也可所以發(fā)育的雞胚。接種的辦法是打針，也可所以拌料喂食。

２、無菌操作

　　培育基經(jīng)高壓滅菌后，用經(jīng)過滅菌的東西（如接種針和吸管等）在無菌條件下接種含菌資料（如樣品、菌苔或菌懸液等）于培育基上，這個進程叫做無菌接種操作。在試驗室查驗中的各種接種有必要是無菌操作。

　　試驗臺面不管是什么資料，一概請求潤滑、水平。潤滑是便于用消毒劑擦拭；水平是倒瓊脂培育基時利于培育皿內(nèi)平板的厚度保持一致。在試驗臺上方，空氣活動應緩慢，雜菌應盡量削減，其周圍雜菌也應越少越好。為此，有必要打掃室內(nèi)，封閉試驗室的門窗，并用消毒劑進行空氣消毒處理，盡可能地削減雜菌的數(shù)量。

　　空氣中的雜菌在氣流小的狀況下，跟著灰塵落下，所以接種時，翻開培育皿的時刻應盡量短。用于接種的用具有必要經(jīng)干熱或火焰等滅菌。接種環(huán)的火焰滅菌辦法：通常接種環(huán)在火焰上充沛燒紅（接種柄，一邊滾動一邊慢慢地來回經(jīng)過火焰三次），冷卻，先觸摸一下培育基，待接種環(huán)冷卻到室溫后，方可用它來挑取含菌資料或菌體，敏捷地接種到新的培育基上。（圖３－４）然后，將接種環(huán)從柄部**環(huán)端逐步經(jīng)過火焰滅菌，恢復。不要直接燒環(huán)，避免殘留在接種環(huán)上的菌體爆濺而污染空間。平板接種時，通常把平板的面歪斜，把培育皿的蓋翻開一小部分進行接種。在向培育皿內(nèi)倒培育基或接種時，試管口或瓶壁外面不要觸摸底皿邊，試管或瓶口應歪斜一下在火焰上經(jīng)過。

二、別離純化

　　富含一種以上的微生物培育物稱為混和培育物（Mixed culture）。假如在一個菌落中所有細胞均來自于一個親代細胞，那么這個菌落稱為純培育（Pure culture）。在進行菌種鑒守時，所用的微生物通常均請求為純的培育物。得到純培育的進程稱為別離純化，辦法有許多種。

１、傾瀉平板法

　　shou要把微生物懸液經(jīng)過一系列稀釋，取必定量的稀釋液與熔化好的保持在40~50°擺布的養(yǎng)分瓊脂培育基充沛混合，然后把這混合液傾瀉到無菌的培育皿中，待凝結(jié)以后，把這平板倒置在恒箱中培育。單一細胞經(jīng)過屢次增殖后構(gòu)成一個菌落，取單個菌落制成懸液，重復上述過程數(shù)次，便可得到純培育物。（圖３－５，a）

1.菌懸液 2.熔化的培育基 3.培育物 4.無菌水

２、涂布平板法#p#分頁標題#e#

　　shou要把微生物懸液經(jīng)過適當?shù)南♂?，取必定量的稀釋液放在無菌的現(xiàn)已凝結(jié)的養(yǎng)分瓊脂平板上，然后用無菌的玻璃刮刀把稀釋液均勻地涂布在培育基外表上，經(jīng)恒溫培育便能夠得到單個菌落。（圖３－５，b）

３、平板劃線法

　　**簡略的別離微生物的辦法是平板劃線法。用無菌的接種環(huán)取培育物少量在平板上進行劃線。劃線的辦法許多，多見的對比簡單呈現(xiàn)單個菌落的劃線辦法有斜線法、曲線法、方格法、放射法、四格法等。（圖３－６）當接種環(huán)在培育基外表上往后移動時，接種環(huán)上的菌液逐步稀釋，**終在所劃的線上分散著單個細胞，經(jīng)培育，每一個細胞長成一個菌落。（圖３－７）

４、富集培育法

　　富集培育法的辦法和原理十分簡略。咱們能夠**一些條件只讓所需的微生物成長，在這些條件下，所需求的微生物能有效地與別的微生物進行競賽，在成長才能方面遠遠超越別的微生物。所**的條件包括挑選**適的碳源、能源、溫度、光、pH、滲透壓和氫受體等。在相同的培育基和培育條件下，經(jīng)過屢次重復移種，**終富集的菌株很簡單在固體培育基上長出單菌落。假如要別離一些專性寄生菌，就有必要把樣品接種到相應靈敏宿主細胞集體中，使其許多成長。經(jīng)過屢次重復移種便能夠得到純的寄生菌。

　　　　

５、厭氧法

　　在試驗室中，為了別離某些厭氧菌，能夠使用裝有原培育基的試管作為培育容器，把這支試管放在沸水0浴中加熱數(shù)分鐘，以便逐出培育基中的溶解氧。然后迅速冷卻，并進行接種。接種后，參與無菌的白臘于培育基外表，使培育基與空氣阻隔。另一種辦法是，在接種后，使用N2或CO2取代培育基中的氣體，然后在火焰上把試管口密封。有時為了更有效地別離某些厭氧菌，能夠把所別離的樣品接種于培育基上，然后再把培育皿放在徹底密封的厭氧培育裝置中。

三、培育

　　微生物的成長，除了受自身的遺傳特性決議外，還遭到許多外界要素的影響，如養(yǎng)分物濃度、溫度、水分、氧氣、ＰＨ等。微生物的品種不一樣，培育的辦法和條件也不盡相同。

１、影響微生物成長的要素

　　微生物的成長，除了受自身的遺傳特性決議外，還遭到外界許多要素的影響。影響微生物成長的要素許多，簡要介紹如下。

1) 養(yǎng)分物濃度

細菌的成長率與養(yǎng)分物的濃度有關(guān):μ=μmax*C/(K+C)

 

　　養(yǎng)分物濃度與成長率的聯(lián)系曲線是典型的雙曲線。

　　K值是細菌成長的很根本的特性常數(shù)。它的數(shù)值很小，標明細菌所需求的養(yǎng)分濃度十分之低，所以在自然界中，它們處處成長。可是養(yǎng)分太低時，細菌成長就會遇到困難，甚**還會逝世。這是由于除了成長需求能量以外，細菌還需求能量來保持它的生計。這種能量稱為保持能。另一方面，跟著養(yǎng)分物濃度的增加，成長率愈接近**大值。

２）溫度

　　在必定的溫度范圍內(nèi)，每種微生物都有自已的成長溫度三基點：**低成長溫度、**適成長溫度和**高成長溫度。在成長溫度三基點內(nèi)，微生物都能成長，但成長速率不一樣。微生物只要處于**適成長溫度時，成長速度才**快，代時**短。超越**低成長溫度，微生物不會成長，溫度太低，甚**會逝世。超越**高成長溫度，微生物也要中止成長，溫度過高。也會逝世。通常狀況下，每種微生物的成長溫度三基點是穩(wěn)定的。但也常受其它環(huán)境條件的影響而發(fā)生變化。

　　依據(jù)微生物**適成長溫度的不一樣，可將它們分為三個類型：

　　a.嗜冷微生物：其是適成長溫度多數(shù)在-10℃－20℃之間

　　b.中溫微生物：其**適成長溫度通常在20℃－45℃之間

　　c.嗜熱微生物：成長溫度在45℃以上。

３）水分

　　水分是微生物進行成長的必要條件。芽孢、孢子萌生，shou要需求水分。微生物是不能脫離水而生計的?？墒俏⑸镏荒茉谒芤褐谐砷L，而不能生活在純水中。各種微生物在不能成長發(fā)育的水分活性范圍內(nèi)，均具有狹小的適當?shù)乃只钚詤^(qū)域。

４）氧氣

　　依照微生物對氧氣的需求狀況，可將它們分為以下五個類型。

　　a.需氧微生物

　　這類微生物需求氧氣供呼吸之用。沒有氧氣，便不能成長，可是高濃度的氧氣對需氧微生物也是有毒的。許多需氧微生物不能在氧氣濃度大于大氣中氧氣濃度的條件下成長。jue大多數(shù)微生物都屬于這個類型。

　　b.兼性需氧微生物

　　這類微生物在有氧氣存在或無氧氣存在狀況下，都能成長，只不過所進行的代謝路徑不一樣算了。在無氧氣存在的條件下，它進行發(fā)酵效果，例如酵母菌的無氧乙醇發(fā)酵。

　　c.微量需氧微生物

　　這類菌是需求氧氣的，但只在0.2大氣壓下成長**佳。這可能是由一它們富含在強氧化條件下失活的酶，因此只要在低壓下效果。

　　d.耐氧微生物

　　這類微生物在成長進程中，不需求氧氣，但也不怕氧氣存在，不會被氧氣所殺死。

　　c.厭氧微生物

　　這類微生物在成長進程中，不需求分子氧。分子氧存在對它們成長發(fā)生毒害，不是被抑制，即是被殺死。#p#分頁標題#e#

２、培育辦法

1）依據(jù)培育時是否需求氧氣，可分為好氧培育和厭氧培育兩大類。

　　好氧培育：也稱“好氣培育”。即是說這種微生物在培育時，需求有氧氣參與，不然就不能成長良好。在試驗室中，斜面培育是經(jīng)過棉花塞從外界取得無菌的空氣。三角燒瓶液體培育多數(shù)是經(jīng)過搖床振動，使外界的空氣源源不斷地進入瓶中。

　　厭氧培育：也稱“厭氣培育”。這類微生物在培育時，不需求氧氣參與。在厭氧微生物的培育進程中，**主要的一點即是要除掉培育基中的氧氣。通?？蛇x用下列幾種辦法：

　　a.下降培育基中的氧化復原電位：常將復原劑如谷胱甘肽、硫基醋酸鹽等，參與到培育基中，便可到達意圖。有的將一些動物的死的或活的安排如牛心、羊腦參與到培育基中，也可適宜厭氧菌的成長。

　　b.化合去氧：這也有許多辦法，主要有：用焦性沒食子酸吸收氧氣；用磷吸收氧氣；用好氧菌與厭氧混合培育吸收氧氣；用植物安排如發(fā)芽的種子吸收氧氣；用發(fā)生氫氣與氧化合的辦法除氧。

　　c.阻隔阻氧：深層液體培育；用白臘油封存；半固體穿刺培育。

　　d.代替驅(qū)氧 用二氧氣碳驅(qū)代氧氣；用氮氣驅(qū)代氧氣；用真空驅(qū)代氧氣；用氫氣驅(qū)代氧氣；用混和氣體驅(qū)代氧氣。

２）依據(jù)培育基的物理狀況，可分為固體培育和液體培育兩大類。

　　固質(zhì)培育：是將菌種接**疏松而賦有養(yǎng)分的固體培育基中，在適宜的條件下進行微生物培育的辦法。

 

　　液體培育：在試驗中，經(jīng)過液體培育能夠使微生物敏捷繁衍，取得許多的培育物，在必定條件下，仍是微生物挑選增菌的有效辦法。